讓我們一起來看看透析袋的選擇
1)選擇合適的截留分子量。
截留分子量的選擇是以預(yù)留在膜內(nèi)的大分子的分子量和將要被除去的小分子污染物的分子量為基礎(chǔ)的。為達到合理有效的分離,需分離的兩種物質(zhì)分子量的比率至少為25。選擇截留分子量的經(jīng)驗法則:選擇截留分子量值約為要保留的大分子分子量的一半,以獲得至少90%的保留率。
分子量差超過100倍時,可以同時保證高收率和高純度。
當分子量差10倍時,為了追求高收率,可以選擇較低的截留分子量;為了追求高純度,可以選擇較高的截留分子量。如產(chǎn)品(Cyt C,20KD)和雜質(zhì)(Vit B12,2KD),側(cè)重收率,選擇截留分子是產(chǎn)品分子量的80%-100%及提高收率,用截留分子量20KD的膜去分離Cyt C和Vit B12可得到約88%左右的收率,但仍含有12%左右的雜質(zhì)。側(cè)重純度但犧牲收率,選用截留分子量高一些膜,樣品保留率在50%-80%左右,用截留分子量為50KD的膜去分離Cyt C和Vit B12以達到收率76%左右和約有2%的B12存留。
對于需對幾種分子進行分離的應(yīng)用,分子之間的分子量差至少為5倍,才能完成有效的膜透析。若不能滿足分子量差的要求,可能需要使用其它的分離技術(shù),如色譜方法或切向流過濾。
2)選擇適當?shù)谋馄綄挾龋w積)
透析袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量。較小的透析管透析更快;較大的透析管因擴散距離較長透析較慢。為易于使用,建議使用總長(包括閉合夾和頂部空間)為大約10-15cm的透析袋。
3)選擇適合的透析膜材質(zhì)
每種膜對不同的分子具有不同的親和性。對于球蛋白,相對的結(jié)合親和性由低到高為CE<RC<PVDF。